體外哺乳動物細胞基因突變（biàn）試驗儀 文章

　

體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀

體外哺（bǔ）乳動物細胞基因突（tū）變試驗儀

 

 

一、 儀器介紹

實驗目的：

本（běn）試驗用於檢測受試物對體外培養的哺乳動物細胞的基因突變作（zuò）用,包括堿基（jī）對突變、移碼（mǎ）突變和缺失等,從而評（píng）價受試物引起突變的可能（néng）性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致（zhì）突變物和移（yí）碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化係統（tǒng）的條件下,使細胞暴露於受試物（wù）一（yī）定時間,然後將細胞傳代培養。胸苷激酶水（shuǐ）平正常的細胞對三氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養液中不能生長分裂,突變細（xì）胞則不敏感,在含有三氟胸苷的選（xuǎn）擇性培養液中能繼續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常的（de）細胞（bāo）對（duì） 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌呤的選擇（zé）性培養液（yè）中可生長形成集落（luò）。基於突變集落數,計算突變（biàn）頻率以評價受試物的致突變性。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染（rǎn）毒效果研（yán）究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試（shì）驗方法第20部（bù）分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養:

選擇（zé）合適細胞係（如L5178Y、CHO），常規傳代培養

2）受（shòu）試物（wù）處理（lǐ）:

暴（bào）露於不同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠時間（jiān）（通常7-10天）使突變表型顯現。

4.）突變體篩選:

TK試驗:使用三氟胸（xiōng）苷（gān）（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使（shǐ）用6-硫代鳥嘌（piào）呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克（kè）隆形成分析:

計數突變集落，計算突變頻率（突變集落數/存活細胞數）

6）數據統計:

與對照組比較（jiào），判斷突變率是否顯著增加。

三、注意（yì）事項

1）細胞活（huó）力控製:受試（shì）物（wù）濃度需（xū）保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝（xiè）活化係統（tǒng）:需加入S9混合物(模擬體內代謝，（如Aroclor 1254誘導的（de）大鼠肝（gān）S9）。

3）假陽性/陰性（xìng）:避免pH、滲透壓等非特異性因素幹擾。

4）合規性（xìng）:   遵循（xún）國際指南（nán）（如OECD 490、ICH S2R1）。

 

 

 

計算：

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