體(tǐ)內哺乳動物(wù)骨髓細胞染色體畸變試驗儀
體內哺乳動物骨髓細胞染色(sè)體畸變試驗儀
儀器介紹
實驗目(mù)的(de):
檢測(cè)受試(shì)物是(shì)否引起哺乳動物骨髓細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性
實驗(yàn)概(gài)述(shù):
染(rǎn)色體(tǐ)是細胞核中具有特殊結構和遺傳功能的小體,當化學物質作用於細胞周期G1期和S期時誘發染色體型畸變,而作用於(yú)G2期(qī)時則誘發染色單(dān)體型畸變。給試驗的大、小鼠腹(fù)腔注入秋(qiū)水仙素抑製細(xì)胞分裂(liè)時紡錘絲的(de)形成,以增加中(zhōng)期分裂相細胞的比例,並使染色體絲縮短、分散、輪廓清晰。在顯微鏡下觀察染色體數目和形態。本方法特別適用於需考慮體內代謝活化後的染色體畸變分(fèn)析。若有證據表明受試物(wù)或(huò)其代謝產物(wù)不能到達骨髓,則不適用於本方法(fǎ),
應用範圍
應用於科(kē)研(yán)、農(nóng)業、衛生、教育(yù)、霧霾狀態可(kě)吸入顆粒染毒效果研究等各個領域
符合標準:
GB/T 15670.16-2017《農(nóng)藥登(dēng)記毒(dú)理學試驗(yàn)方法第16部分:體內哺乳動物骨髓細胞染(rǎn)色體(tǐ)畸變試驗》
二、試驗流程
1)動物選擇:常用齧齒類動物(大鼠或小鼠(shǔ)),通常每組至少5隻/性(xìng)別。
2)給藥方案:
單次給藥:通常在采樣前12-48小時給藥(覆蓋細胞周期)
多次給藥:若受試物代謝或毒性需重複(fù)暴露。
3.陽性對照:已知致畸變劑(如環磷酰胺)
4.陰性(xìng)對照:溶劑對照(如生理鹽水(shuǐ)或DMSO)
5.采樣時間:通常在給藥(yào)後(hòu)24小時和(hé)48小時采集骨髓細胞(覆蓋不(bú)同細胞周期階段)
6.染色體製備:
處死動物後取出骨髓(suǐ)細胞。
用秋水(shuǐ)仙素(Colchicine)處理,阻(zǔ)斷細胞(bāo)分裂於中期。低滲處理、固(gù)定、製片並染(rǎn)色(如Giemsa染色)
7.鏡檢分析:
觀察(chá)至(zhì)少200個中期分裂相/動(dòng)物(wù),記錄(lù)畸變類型和頻率,
區分染色體型畸變(如雙著絲粒體)和染色單體型畸(jī)變(如斷裂)
三、結果判定
1)劑量相關性:畸變率隨劑量增加而(ér)升高。
2)統計學差異(yì):試驗(yàn)組畸變率顯著高(gāo)於陰性對照組(如p<0.05)
3)生物學意義:需結合曆史對照數據和畸變類型綜合評估。